2. 1. 5. PREPARACIÓN Y MANEJO DE SOLUCIONES STOCK
PREPARACION DE SOLUCIONES STOCK PARA EL MEDIO MS.
Métodos los cuales se mencionan posteriormente estos se indican en la parte de abajo, se utilizan para la preparación de las 4 soluciones que componen al medio de cultivo para la propagación de plantas in vitro es por ello que al momento de querer preparar dicha solución se deben de hacer cálculos dependiendo la cantidad de plantas que se deseen cultivar, de acuerdo a esto mediante los cálculos ya que por medio de estos se indicara cuanto se pesara de cada componente del MS; con el fin de poder obtener un buen manejo y por lo tanto esto permite que se tenga una buena propagación.
Preparación de una solución stock de macronutrientes MS x10 (solución 1)
Por ejemplo para obtener un litro de dicha solución llénese un erlenmeyer de 1 l con 500 ml de agua destilada. A continuación añádase cada uno de sus componentes (Tabla 1) disolviéndolo totalmente antes de añadir para evitar que se hagan grumos y sobre todo para que la solución este bien concentrada en la siguiente tabla se representan las sustancias y el peso en gramos que se le agregara para la preparación de 500ml por lo consiguiente se representa las siguiente cantidades de sustancias o componentes de un MS:
Substancia
|
Peso (en gramos)
|
NH4NO3
|
16,5
|
KNO3
|
19,0
|
CaCl2·2H2O
|
4,4
|
MgSO4·7H2O
|
3,7
|
KH2PO4
|
1,7
|
Para finalizar, bastará con verter el contenido en una probeta de 1 l, enrasar con agua destilada, trasladar la solución a su recipiente definitivo y agitarlo dejándolo reposar para su mejor concentración de la solución. Esta solución debe guardarse a 4 ºC en el refrigerador.
Para obtener un litro de dicha solución llenar un erlenmeyer de 1 l con 500 ml de agua destilada. A continuación añadir cada uno de sus componentes (Tabla 2) disolviéndolo totalmente antes de añadir el siguiente.
Substancia
|
Peso (en mg)
|
MnSO4·4H2O
|
2.230,0
|
ZnSO4·7H2O
|
860,0
|
H3BO3
|
620,0
|
KI
|
83,0
|
Na2MoO4·2H2O
|
25,0
|
CuSO4·5H2O
|
2,5
|
CoCl2·6H2O
|
2,5
|
Para terminar, proceder del mismo modo que con la solución stock de macronutrientes. Esta solución también debe almacenarse a 4 ºC.
Preparación de una solución stock de hierro MS x 200 (solución 3)
Para obtener 100 ml de dicha solución deben seguirse los pasos siguientes:
Calentar unos 50 ml de agua destilada en un agitador magnético en dado caso que no se cuente con este material se debe de agitar con una varilla para la disolución uniforme de los componentes vertiéndolos por completo y sobre todo para que no queden grumos, teniendo un preparado para tal propósito. Cuando el agua esté templada, añadir 556 mg de FeSO4·7H2O. Una vez se haya disuelto el producto anterior, agregar 744 mg de Na2EDTA·H2O. A continuación, añadir 1 lenteja de NaOH.
Ya disueltos todos los elementos, verter el contenido en una probeta de 100 ml, enrasar, trasladar la solución a su envase definitivo y etiquetar debidamente. Esta solución se almacena a 4 ºC.
Para obtener 100 ml de dicha solución llenar un erlenmeyer con unos 50 ml de agua destilada y añadir uno a uno, hasta total disolución los siguientes componentes:
Substancia
|
Peso (en mg)
|
Mio-inositol
|
2.000
|
Ácido nicotínico
|
10
|
Piridoxina·HCl
|
10
|
Tiamina·HCl
|
2
|
Glicina
|
40
|
A continuación, verter el contenido en una probeta de 100 ml, enrasar, llenar el recipiente definitivo con la solución y etiquetarlo. La solución stock de vitaminas debe almacenarse a -20 ºC.
Componentes de un MS los cuales les proporcionan los nutrientes necesarios para una efectiva propagación de plantas.
SALES MINERALESMS (MURASHIGE AND SKOOG, 1962) (g/l)
(NH4 )NO3 1.650
KNO3 1.900
CaCl2.2H2O 0.440
MgSO4.7H2O 0.370
KH2PO4 0.170 MS X 10
FeSO4.7H2O 0.0278
Na2EDTA. 2H2O 0.0372 MS X 200
MnSO4.H2O 0.0169
ZnSO4.7H2O 0.0086
H3BO3 0.0062
KI 0.00083
Na2MoO4.2H2O 0.00025
CuSO4.5H2O 0.000025
CoCl2.6H2O 0.000025 MS X 100
Mioinositol 0.100
Tiamina HCl 0.0001
Acido nicotínico 0.0005
Piridoxina HCl 0.0005
Glicina 0.002 MS X 200
Sacarosa 30 g.
Agar-agar 2.7 g.
No hay comentarios:
Publicar un comentario